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**试验用试剂和培养基配方
日期：2024-05-12 12:51
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摘要：
**试验用试剂和培养基配方
1.磷酸盐缓冲液（PBS，0.03mol/L，pH7.2）
无水磷酸氢二钠 2.83g
磷酸二氢钾 1.36g
蒸馏水加至 1000ml
将各成分加入到 1000ml 蒸馏水中，待完全溶解后，调 pH 至 7.2～7.4，于 121℃压力蒸气** 20min备用。
2.革兰染色液
第1液：结晶紫溶液
结晶紫乙醇饱和溶液 100ml
结晶紫 4g～8g
95%乙醇 100ml
1%草酸胺溶液
第2液：卢戈碘液
碘化钾 2g
碘 1g
蒸馏水 200ml
第3液：脱色剂
（1）95%乙醇
（2）丙酮乙醇溶液 100ml
95%乙醇 70ml
丙酮 30ml
第4液：稀释石炭酸复红液
碱性复红乙醇饱和溶液 10ml
碱性复红 5g～10g
5%石炭酸溶液 90ml
蒸馏水 900ml
3.孔雀绿与沙黄芽孢染色液
第1液 5.0%孔雀绿水溶液
第2液0.5%沙黄水溶液
4.无菌检验用洗脱液
吐温-80 1g
蛋白胨 10g
氯化钠 8.5g
蒸馏水 1000ml
将各成分加入到 1000ml 0.03mol/L PBS液中，加热溶解后调pH至 7.2～7.4，于121℃压力蒸汽**20min备用。
5.标准硬水(硬度342mg/L)
氯化钙(CaCl2) 0.034g
氯化镁(MgCl2·6H2O) 0.139g
蒸馏水加至 1000ml。
6.有机干扰物
牛血清白蛋白 30g
蒸馏水 1000ml
溶解后用微孔滤膜(孔径为0.45μm)滤过**，冰葙保存备用。
7.营养琼脂培养基
蛋白胨 10g
牛肉膏 5g
氯化钠 5g
琼脂 15g
蒸馏水 1000ml
除琼脂外其他成份溶解于蒸馏水中，调 pH 至 7.2～7.4，加入琼脂，加热溶解，分装，于121℃压力蒸汽**20min备用。
8.营养肉汤培养基
蛋白胨 10g
牛肉膏 5g
氯化钠 5g
蒸馏水 1000ml
将各成分溶解于蒸馏水中，调 pH 至7.2～7.4，分装，于121℃压力蒸汽**20min备用。
9.稀释液：胰蛋白胨生理盐水溶液（TPS）。
胰蛋白胨 1.0g
氯化钠 8.5g
先用900ml以上蒸馏水溶解，并调节pH值在7.0±0.2，*终用蒸馏水加至1000ml，分装后，经121℃压力蒸汽**后使用。
10.胰蛋白胨大豆肉汤培养基（TSB）
胰蛋白胨 1.5%
大豆蛋白胨 0.5%
氯化钠 0.5%
用蒸馏水配制而成，调节pH为7.2±0.2，经121℃压力蒸汽**后使用。
11.胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA）
胰蛋白胨 1.5%
大豆蛋白胨 0.5%
氯化钠 0.5%
琼脂 1.6%
用蒸馏水配制而成，调节pH为7.2±0.2，经121℃压力蒸汽**后使用。
12.品红亚硫酸钠培养基
蛋白胨 10g
酵母浸膏 5g
牛肉膏 5g
乳糖 10g
琼脂 15g～20g
磷酸氢二钾 3.5g
无水亚硫酸钠 5g
5%碱性品红乙醇溶液 20ml
蒸馏水 1000mg
以上各成分蒸馏水溶解，调pH 至7.2～7.4，装瓶，经121℃压力蒸汽**后使用。
13.溴甲酚紫蛋白胨培养液
蛋白胨 10g
葡萄糖 5g
可溶性淀粉 1g
溴甲酚紫乙醇溶液 10ml
蒸馏水 1000ml
将蛋白胨、葡萄糖溶解于蒸馏水中，调pH 至 7.0～7.2，加入2% 溴甲酚紫酒精溶液，摇匀后，分装(每管5ml)，并放入一个小倒管，于 115℃压力蒸汽**30min。置4℃冰箱备用。
14.嗜热脂肪杆菌恢复琼脂培养基
蛋白胨 10g
牛肉膏 3g
可溶性淀粉 1g
葡萄糖 1g
琼脂 20g
蒸馏水 1000ml
以上各成分蒸馏水溶解，调pH 至7.0～7.2，装瓶，经115℃压力蒸汽**30min后使用。
15.需氧-***琼脂培养基
酪胨(胰酶水解) 15g
牛肉膏 3g
葡萄糖 5g
氯化钠 2.5g
L-胱氨酸 0.5g
硫乙醇酸钠 0.5g
酵母浸出粉 5g
新鲜配制的 0.1% 刃天青溶液 1.0ml
(或新配制的 0.2% 亚甲蓝溶液 0.5ml
琼 脂 0.5g~0.7g
蒸馏水 1000ml
除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成份加入蒸馏水中，微温溶解后，调 pH 至弱碱性，煮沸、滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调 pH 至 6.9～7.3，分装于 115℃压力蒸汽** 30min。
16.沙堡琼脂培养基
葡萄糖 40g
蛋白胨 10g
琼脂 20g
蒸馏水 1000ml
将上述成分混合后，加热至完全溶解，调pH 至5.6±0.2，于 115℃压力蒸汽** 30min备用。
17.沙堡液体培养基
葡萄糖 40g
蛋白胨 10g
蒸馏水 1000ml
将上述成分混合后，加热至完全溶解，调pH 至5.6±0.2，于 115℃压力蒸汽** 30min备用。
18.无菌试验用**培养基
磷酸二氢钾(KH2PO4) 1g
硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.5g
蛋白胨 5g
葡萄糖 10g
蒸馏水 1000ml
除葡萄糖外，上述各成分加入蒸馏水内，微温溶解后，调节pH 约6.8，煮沸，加葡萄糖溶解后，摇匀滤清，调pH 使**后为6.4±0.2，分装，115℃压力蒸汽**20min备用。
19.人**细胞维持培养基
1640干粉培养基 10×10.4g
L谷氨酰胺 2.93g
丙酮酸钠 1.004g
青霉素 80万单位
链霉素 100万单位
碳酸氢钠 20.0g
Hepes 23.9g
去离子水加至 10000ml
除青霉素、链霉素外，其余各成分溶于蒸馏水中，调pH至7.0～7.2，115℃压力蒸汽**20min备用。临用前加入无菌青霉素、链霉素溶液。
20.人**细胞完全培养基
在人**细胞维持培养基中加入10%无菌小牛血清。
21.血琼脂培养基
营养琼脂 100ml
脱纤维羊血(或兔血) 10ml
将营养琼脂加热熔化待冷至50℃左右，以无菌操作将10ml 脱纤维血加入后摇匀，倒平皿置冰箱备用。
22.霉菌培养基
胨 5g
葡萄糖 10g
磷酸二氢钾 1g
氯化钠 5.0g
硫酸镁 0.5g
蒸馏水 1000ml
除葡萄糖外，取上述成份加入蒸馏水中，微温溶解后，调 pH 至6.0 ，煮沸，加入葡萄糖溶液后，摇匀，滤清，调 pH 至 5.6～6.0，分装于 115 ℃压力蒸汽**30min。
23. SCDLP液体培养基
酪蛋白胨 17g
大豆蛋白胨 3g
葡萄糖 2.5g
氯化钠 5g
磷酸氢二钾 2.5g
卵磷脂 1g
吐温80 7g
蒸馏水 1000ml
将各种成份混合(如无酪蛋白胨和大豆蛋白胨可用日本多胨代替)，加热溶解后，调pH 至 7.2～7.3，分装于121℃压力蒸汽**20min，摇匀，冷至 25℃使用。
24.伊红亚甲蓝培养基
蛋白胨 10g
乳糖 10g
磷酸二氢钾 2g
2%伊红溶液 2ml
0.65%亚甲蓝溶液 1ml
琼 脂 17g
蒸馏水 1000ml
将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，调pH 至 7.1，分装于121℃压力蒸汽**20min。临用时，以无菌操作加入乳糖并加热溶化琼脂，冷至 50℃时，加入伊红和亚甲蓝溶液摇匀，倒平皿置４℃冰箱备用。
25. 0.5% 葡萄糖肉汤培养基
胨 10g
氯化钠 5g
葡萄糖 5g
肉浸液 1000ml
取胨与氯化钠加入肉浸液内，微温溶解后，调pH 至弱碱性，煮沸、加入葡萄糖溶解后，摇匀，滤清，调 pH 至7.0～7.4，分装，于115℃压力蒸汽**30min。
26. 甘露醇培养基
蛋白胨 10g
牛肉膏 5g
氯化钠 5g
甘露醇 10g
0.2%溴麝香草酚蓝溶液 12ml
蒸馏水 1000ml
将蛋白胨、氯化钠、牛肉膏加入蒸馏水中，加热溶解，调 pH 至7.4，加入甘露醇和溴麝香草酚蓝混匀后，分装，于 115℃压力蒸汽**20min。
27. 乳糖胆盐发酵管
蛋白胨 20g
猪胆盐(或牛，羊胆盐) 5g
乳糖 10g
0.04%溴甲酚紫水溶液 25ml
蒸馏水 1000ml
将蛋白胨、胆盐及乳糖溶解于蒸馏水中，调pH 至 7.4，加入0.04% 溴甲酚紫水溶液，分装(每管10ml)，并放入一个小倒管，于 115℃压力蒸汽**15min。
28. 乳糖发酵管
蛋白胨 20g
乳糖 10g
0.04%溴甲酚紫水溶液 25ml
蒸馏水 1000ml
将蛋白胨及乳糖溶解于蒸馏水中，调pH 至 7.4，加入0.04% 溴甲酚紫水溶液，分装(每管10ml)，并放入一个小倒管，于 115℃压力蒸汽**15min。
29．1%苋菜红
苋菜红 1%
西曲溴胺 0.05%
30．MEA培养基
麦芽浸膏 30g
大豆蛋白胨 3g
琼脂 15g
双蒸水加至 1000ml
将上述成份制成溶液于121℃下**15mln，**后无菌调pH至5.6±0.2备用。
31．MEB肉汤
麦芽浸膏 20g
双蒸水加至 1000ml
将上述成份制成溶液于121℃下**15mln，**后无菌调pH至6.9±0.2备用。
32．注意事项
(1)双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外，其它成分为乳糖胆盐发酵管的2 倍；3倍浓缩乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外，其它成分为乳糖胆盐发酵管的3倍。
(2)配制培养基的容器不宜用铜锅或铁锅，以免影响**生长。
(3)培养基用的试管口和三角烧瓶口应用普通棉花制成的棉塞，再用牛皮纸包好。
(4)试剂与培养基配制好后应置清洁处保存，常温下不超过1 个月。
